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      HOLDER : 생물나라(조상환)

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    제품실험자료

    PCR 실험세트 - 생물나라

     

    . 제품소개

     

    이 제품은 Lambda Phagegenome을 사용하여 PCR의 기초를 탐구할 수 있게 설계된 PCR kit입니다. 학생들은 세 개의 다른 프라이머 세트를 사용하여 Lambda Phage genome의 세 부분을 증폭시키고, 그 크기를 예측할 수 있습니다.

     

    실험은 약 2시간 소요되며, PCR의 기본 이론과 실험 기구 사용법을 충분히 숙지 한 뒤 사용하는 것을 권장합니다.

     

    ● 본 제품으로 약 10회의 테스트가 가능합니다.

    ● 학급 혹은 그룹을 나누어 실험을 진행하실 때는 시약의 오염을 방지하기 위하여 소분하여 사용하는 것을 권장합니다.

     

     

    . 제품구성

     

    세트에 제공되는 구성품

    DNA Polymerase 2X Master Mix

    450 μL

    Primer Set 1, Primer Set 2, Primer Set 3

    50 μL

    Lambda Genomic DNA

    140 μL

    UltraPure dH2O

    500 μL

    DNA Ladder (100bp)

    55 μL

    0.2mL PCR Tubes

    50 tubes

    Dyne LoadingSTAR DNA Stain

    500 μL

    10X TBE Buffer

    125mL

    Premade Gel TBE, 1.5%

    5ea

     

    실험에 필요한 기기 (키트에는 포함되어 있지 않습니다.)

    Mini PCR machine

     

    LED Transilluminator

     

    전기영동장치

     

    마이크로피펫(2-20μL)

     

     

     

    . 실험방법

     

    샘플준비

    - 실험 1회 진행 시 필요한 시약의 양은 아래 표를 참고바랍니다.

    DNA Polymerase 2X Master Mix

    40 μL

    Primer Set 1, Primer Set 2, Primer Set 3

    4 μL

    Lambda Genomic DNA

    12 μL

    dH2O

    16 μL

    DNA Ladder (100bp)

    4 μL

    0.2mL PCR Tubes

    4 tubes

     

     

    2. 4개의 PCR tube에 시약을 분주합니다.

     

    Tube 1

    Tube 2

    Tube 3

    Tube 4(NC)*

    2X Master Mix

    10 μL

    10 μL

    10 μL

    10 μL

    Primer

    Primer1: 4 μL

    Primer2: 4 μL

    Primer3: 4 μL

    -

    Lambda DNA

    3 μL

    3 μL

    3 μL

    3 μL

    dH2O

    3 μL

    3 μL

    3 μL

    3 μL

    Total

    20 μL

    20 μL

    20 μL

    20 μL

    * 음성대조군(Negative Control)의 경우 조성을 달리하여 실험할 수 있습니다) 2X Master Mix 10μL, Primer 4μL, dH2O 6μL

     

     

    3. 표와 같이 PCR을 설정하여 작동시킵니다.

    단계

    온도

    시간

    사이클

    초기 변성

    95

    5:00

    1

    변성

    95

    0:30

    30

    결합

    58

    0:30

    신장

    72

    1:00

    최종 신장

    72

    5:00

    1

     

    4

     

     

    4. 전기영동

     

    PCR 이 완료되면 PCR 산물 10ul 당 2 ul 의 비율로 Dyne LoadingSTAR 를 투입 후, 아가로오스 겔에 전기영동합니다.

    UV 로 겔을 확인하기 위해서는 LED Transilluminator를 사용하세요.

     

    <예시>

    1.5 아가로오스 젤을 준비한다.

    0.5X TBE 버퍼가 담긴 탱크에 젤을 담근 후, PCR 산물을 로딩한다.

    100V 에서 25~30분 동안 전기영동을 진행한다.

     

     

    . 실험결과 판독

     

    - 전기영동한 젤에 UV 빛을 비추어 증폭된 PCR 산물을 확인합니다.

     

    결과 예시

     

    사용 프라이머

    사이즈(bp)

    Lane 1

    Primer set 1

    202

    Lane 2

    Primer set 2

    304

    Lane 3

    Primer set 3

    504

    Lane 4

    음성대조군

    -


     

     

    . 사용시 주의사항

     

    본 키트를 사용하실 때 주의할 사항입니다. 잘 숙지하시고 올바르게 사용하여 주십시오.

    본 키트를 실험 이외의 다른 용도로 사용할 수 없습니다.

     

     

    . 보관방법

     

    DNA Polymerase 2X Master Mix, Primer Set1, Primer Set2, Primer Set3, Lambda DNA, DNA Ladder,(냉동보관)

    Dyne LoadingSTAR™ DNA stain, Premaed gel TBE, 1.5% (냉장보관)

     

    유효 기한 : 제조일로부터 6개월

     

     

    . 문제해결

    상태

    확인 및 조치사항

    음성대조군 밴드가 뜸

    PCR 시약이 오염되었을 경우, 음성대조군에 증폭 밴드가 뜰 수 있습니다. 오염을 일으킬 수 있는 사항을 확인하고, 주의해서 실험합니다.


    70% 알코올로 실험 테이블, 파이펫 등 실험 기구 소독


    실험복, 실험 장갑 착용, 필요한 양 만큼 시약을 덜어서 사용

     

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